REDBIO México 2010

Folio: 69
Tipo de presentación: Cartel
Tema: EstrŽs Abi—tico

Validaci—n de genes de referencia end—gena como control interno para estudios de expresi—n gŽnica durante estrŽs por baja temperatura en Eucalyptus globulus mediante PCR en Tiempo Real

Marta Fern‡ndez 1*,2*, Carlos Villaroel 2*, Cristi‡n Balbont’n 3*, Sofia Valenzuela 1*,2*
1 Facultad de Ciencias Forestales, Casilla 160-C, Universidad de Concepci—n, Concepci—n, Chile. 2 Centro de Biotecnolog’a, Casilla 160-C, Universidad de Concepci—n, Concepci—n, Chile. 3 Gen—mica Forestal S.A. Casilla 160-C, Universidad de Concepci—n, Concepci—n, Chile.

RESUMEN (ABSTRACT)
"Durante los œltimos a–os, numerosos estudios han orientado sus esfuerzos en comprender los mecanismos por los cuales las plantas responden a la baja temperatura, mediante el an‡lisis de la expresi—n gŽnica. El mŽtodo de PCR en Tiempo Real posee grandes ventajas respecto a mŽtodos tradicionales gracias a su alta sensibilidad, especificidad y reproducibilidad para detectar bajo nœmero de copias de ARNm, sin embargo requiere el uso de uno o varios genes de referencia end—gena cuya expresi—n constitutiva, e idealmente inalterable en distintos tratamientos, permita utilizarlos como controles internos. En este trabajo se analiz— la estabilidad de expresi—n, utilizando el software geNorm, de seis genes de referencia end—gena comœnmente utilizados en plantas (Factor de Elongaci—n 1-_, Actina, _-Tubulina, Subunidad de la Prote’na Fosfatasa 1A, Prote’na SAND y Ubiquitina C). La cuantificaci—n relativa se realiz— en tejido foliar de plantas juveniles de Eucalyptus globulus expuestas a un ensayo de aclimataci—n y desaclimataci—n a baja temperatura y cambio de fotoperiodo. Los resultados de las cinco condiciones experimentales evaluadas indican que Ubiquitina C y _-Tubulina fueron los genes m‡s estables. En paralelo, un gen Elip (early light induced protein), cuya expresi—n es inducida en condiciones de fotoinhibici—n y baja temperatura en plantas, mostr— diferencias en la cuantificaci—n relativa con respecto al tipo y nœmero de genes de referencia end—gena utilizados, demostrando la importancia de la adecuada elecci—n del control interno en ensayos de expresi—n gŽnica."


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