REDBIO México 2010

Folio: 623
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Otro

IMPLEMENTACIîN DE PCR DôPLEX PARA EL DIAGNîSTICO DE Babesia bovis Y Anaplasma marginale

"Carmen Rojas Mart’nez1*, Antonio çlvarez Mart’nez1, Julio V. Figueroa Mill‡n
Carr. Fed. Cuernavaca-Cuautla No.8534 Col. Progreso C.P. 62550. Jiutepec, Mor. MŽxico."

RESUMEN (ABSTRACT)
"En la ganader’a de las regiones tropicales de MŽxico, los bovinos est‡n expuestos a diferentes pat—genos, destacando los causantes de la babesiosis y anaplasmosis. El diagn—stico oportuno y adecuado permite la prevenci—n o control de la enfermedad. As’, el objetivo de este estudio fue instrumentar el ensayo de reacci—n en cadena de la polimerasa en formato dœplex (PCR-D) para detectar Babesia bovis y Anaplasma marginale. De una suspensi—n de eritrocitos infectados con estos pat—genos se hicieron diluciones decuples seriadas desde 1% hasta 1X10-_¼ % en un volumen final de 200µl. Previo a la extracci—n de ADN las muestras fueron tratadas con saponina, la extracci—n de ADN se hizo con el uso de un paquete comercial. Para la amplificaci—n se realizo un formato anidado, se dise–aron cuatro pares de iniciadores para cada agente. Se utiliz— una mezcla maestra comercial (Go Taq Green Master Mix, Promega), el protocolo de amplificaci—n fue: 95 _C por 5 min. para predesnaturalizaci—n; 94 _C 1 min. para desnaturalizaci—n, 60.8 _ C 1 min. para alineaci—n y 72 _C 2min. para extensi—n por 35 ciclos y 72 _C 15 min. para la extensi—n final. Para la visualizaci—n de los productos de amplificaci—n se usaron geles de agarosa 2.5 %. El tama–o de los productos del PCR-D anidado obtenidos fueron: para Anaplasma marginale 465 bp y para Babesia bovis 274 bp. La alta sensibilidad anal’tica permiti— la detecci—n de ambos agentes hasta la m‡xima diluci—n realizada 1X10-7. Los resultados muestran la elevada sensibilidad y especificidad tanto anal’tica como epidemiol—gica del PCR-D anidado. Se sugiere que su uso puede facilitar la detecci—n de animales portadores asintom‡ticos en el campo; adem‡s permite la optimizaci—n de la muestra, reducci—n en tiempo y costo para el diagn—stico. Adicionalmente es una metodolog’a que puede ser f‡cilmente adaptada como prueba de rutina para laboratorios de diagnostico veterinario."


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