REDBIO México 2010

Folio: 581
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Marcadores Moleculares

Optimización del protocolo de aislamiento de DNA y PCR para el análisis de Anemopsis californica mediante marcadores moleculares

Melesio Gutiérrez Lomelí * (1), Samuel Villaseñor Alvarado (1), Carmen Lizette Del Toro Sánchez (1), Pedro Javier Guerrero Medina (1), Araceli Rodríguez Sahagún (1), Osvaldo Adrian Castellanos Hernández (1), Juan Alfredo Morales Del Río (1).
* Autor para correspondencia (Corresponding author)

RESUMEN (ABSTRACT)
"Anemopsis californica, comúnmente conocida como hierba mansa, es una planta herbácea perenne perteneciente a la familia Saururaceae, que ha sido utilizada como planta medicinal en forma de té, tintura, baños de asiento, infusión, polvo o cápsulas, y para el tratamiento de diversas enfermedades. A la fecha, no existen investigaciones de caracterización genética en relación a esta planta, para lograr este objetivo es necesario la obtención de DNA genómico de buena calidad. En este estudio se presenta la optimización del método de aislamiento y las condiciones de PCR para el análisis por marcadores moleculares de plantas de A. californica. El método de extracción involucra ligeras modificaciones del método CTAB, lleva un paso previo de incubación en etanol absoluto durante una hora, antes de comenzar la molienda y un paso extra de adición de sulfato de amonio 5 M. El rendimiento fue de 1 µg/µL y la relación de pureza del DNA de 1.77 ± 0.03 indicando niveles mínimos de metabolitos contaminantes. El DNA aislado se utilizó para realizar una PCR, tipo RAPD. El protocolo de PCR se optimizó y se encontraron las siguientes condiciones: 3mM MgCl2, 0.4 µM de primer, 10 ng de DNA templado y 1 unidad de Taq polimerasa, y una temperatura de alineamiento de 40°C. Los productos amplificados fueron reproducibles en todas las reacciones de PCR. Este método puede ser usado en técnicas de identificación de huellas genéticas, marcadores moleculares y estudios de diversidad genética en variedades no solo de A. californica sino de otras plantas medicinales."