REDBIO México 2010

Folio: 478
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Transformación Genética de Plantas

Obtención de una biblioteca de dominios VHH por medio de un fácil y rápido screening utilizando un vector modificado para la posterior expresión de anticuerpos VHH antiovoalbúmina en tabaco

Junco M (1), Saccodossi N (2), Marconi P (1), De Simone E (3), Leoni G (2), Alvarez MA * (1).
* Autor para correspondencia (Corresponding author) malvarez@conicet.gov.ar

1- Instituto de Ciencia y Tecnología Dr. César Milstein- CONICET. Saladillo 2468 (1440) Ciudad de Buenos Aires, Argentina; 2- IDEHU-Cátedra de Inmunología, FFYB-UBA, Junín 956 (1113) Ciudad de Buenos Aires, Argentina; 3- Cátedra de Fisiología Animal, FCV-UBA, Ciudad de Buenos Aires, Argentina

RESUMEN (ABSTRACT)
"Los camélidos poseen en suero IgG homodiméricas de cadenas pesadas (HCAbs) junto con IgG heterotetraméricas convencionales. Actualmente se conocen 3 isotipos de IgG. IgG1 presenta la estructura convencional, IgG2 e IgG3 son HCAbs. Los HCAbs carecen de cadena liviana y de CH1. En los dominios variables, los HCAbs presentan sustituciones hidrofílicas por hidrofóbicas en posiciones conservadas (VHH). Los VHH poseen alta estabilidad térmica y química y son capaces de interaccionar con epitopes crípticos y modular sitios activos enzimáticos. Son fácilmente expresados en forma recombinante por su bajo PM (15kDa) y son los fragmentos más pequeños con capacidad de reconocer al antígeno en forma específica. El objetivo de este trabajo es obtener, por medio de la técnica de Display en Fagos, la secuencia de VHH con especificidad para Ovoalbúmina (OVA) y luego, expresar la proteína recombinante en tabaco. Para ello, se realizaron RT-PCR a partir de ARN de linfocitos B de sangre periférica de llama previamente inmunizada con OVA. Los productos de las PCR se clonaron dentro del vector pHEN2 killer. Este vector fue generado en nuestro grupo de trabajo, insertando el gen letal ccdB al fagémido pHEN2. El inserto reemplaza a ccdB y la bacteria puede crecer, si ccdB no es reemplazado, se expresa la proteína CCDB, letal para la mayoría de las cepas de bacterias. Por medio de la secuenciación, se confirmó la estructura del vector y los VHH amplificados. Con esta estrategia se simplificará el screening de las colonias y la obtención de VHH específicos para OVA."