REDBIO México 2010

Folio: 442
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Control Biol—gico

Efecto de tres mŽtodos de extracci—n de ADN del suelo sobre el rendimiento y la calidad biol—gica del ADN.

Pablo C‡ceres (1), Cecilia Cordero (1), Karla Quiroz (2), Juan Carlos Bobadilla (1), Carmen Bravo (1), Basilio Carrasco (3), Rolando Garc’a-Gonz‡les. * (1).
* Autor para correspondencia (Corresponding author) rgarciag@ucm.cl

1- Departamento de Ciencias Forestales, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Universidad Cat—lica del Maule. Avenida San Miguel, 3605, Talca. Chile; 2- Doctorado en Ciencias Agrarias, Facultad de Agronom’a. Universidad de Talca, Avenida Lircay s/n. Talca, Chile; 3- Departamento de Fruticultura. Facultad de Agronom’a e Ingenier’a Forestal. Pontificia Universidad Cat—lica de Chile. Vicu–a Mackenna 4860, Casilla 306, Correo 22. Santiago de Chile, Chile

RESUMEN (ABSTRACT)
"La biodiversidad de microorganismos de la riz—sfera puede ser un indicador de la calidad y la aptitud de los suelos para su cultivo y uso. En este trabajo se compar— la eficiencia de tres mŽtodos de extracci—n de ADN a partir de la riz—sfera de especies del bosque hidr—filo. Se evalu— el uso de Buffer de lisis, Buffer de lisis modificado y el uso de kit comercial de extracci—n (Power Soil) y su efectividad para producir ADN de calidad biol—gica con rendimientos que permitan su uso en estudios de biodiversidad. De igual forma, se evalu— el efecto del Nitr—geno en el proceso de ruptura celular en todos los protocolos estudiados. Se obtuvieron rendimientos de ADN desde 4,2 ng/g de suelo procesado hasta 17,312 µg/g de suelo procesado. El mayor rendimiento de ADN se obtuvo cuando las muestras se trataron con buffer de lisis modificado con Proteinasa K, con un rendimiento de 7,384 µg/g de suelo procesado. La calidad biol—gica del ADN se determin— mediante la obtenci—n de amplicones mediante PCR utilizando partidores universales 16S de bacterias. Se obtuvo ADN de calidad biol—gica para PCR en todos los protocolos, pero la eficiencia del mŽtodo dependi— de la diluci—n del ADN en el desarrollo de la tŽcnica. Los tres mŽtodos de extracci—n generaron productos de PCR en el por encima del 90% de las muestras analizadas. Se observ— que el factor de diluci—n del ADN afecta la eficiencia de la tŽcnica de PCR en los tres protocolos evaluados pues para la extracci—n con Kit comercial la mayor eficiencia se obtuvo en la diluci—n 1/10 (95%); para la extracci—n con Buffer A la mejor diluci—n fue 1/100 (90%); y para la extracci—n con Proteinasa K fue la diluci—n 1/1000 (95%). El uso de Nitr—geno durante el proceso de ruptura celular no influy— sobre la cantidad ni la calidad biol—gica del ADN generado en los tres protocolos."


Regresar al Indice