REDBIO México 2010
Folio: 404
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Otro
El sistema Cre/loxP1 como una herramienta genŽtica en Yarrowia lipolytica
Raymundo Rosas-Quijano 1*, Cluade Gaillardin 2.
1 Centro de Biotecnolog’a Gen—mica, Instituto PolitŽcnico Nacional, Reynosa, Tamaulipas, MŽxico. C. P. 87710. 2 Microbiologie et GŽnŽtique MolŽculaire, CNRS UMR 2582 INRA UMR 1238, Institut National Agronomique Paris-Grignon, Thiverval Grignon, 78850, France.
RESUMEN (ABSTRACT)
"Yarrowia lipolytica es la levadura no convencional mejor estudiada; su genoma ha sido totalmente secuenciado y existen numerosas herramientas moleculares para su estudio; sin embargo, al igual que otros sistemas biol—gicos, los marcadores genŽticos de selecci—n son limitados; por lo tanto, surge la necesidad de reciclar dichos marcadores. Aprovechando la ventaja de que Y. lipolytica es capaz de expresar diferentes fuentes de prote’na recombinante, el objetivo fue sobreexpresar en esta levadura la recombinasa Cre del fago P1 y posteriormente evaluar su actividad biol—gica. A partir de un pl‡smido replicativo se construy— un pl‡smido de expresi—n para la recombinasa Cre bajo la direcci—n de un promotor fuerte; la actividad de la recombinasa se evalu— en mutantes obtenidas por transposici—n. El dise–o del mTnYl utilizado contiene en sus extremos dos secuencias lox que son las secuencias blanco de la recombinasa del fago P1. En estas mutantes se sobreexpres— a la recombinasa Cre del fago P1 y se demostr— la eficiencia de su actividad y especificidad haciendo el recambio del gen marcador de selecci—n contenido en el mTnYl (ura3). Se amplific— por PCR el segmento que fue modificado por la recombinasa y se secuenci— para corroborar su correcta actividad biol—gica. Esta estrategia es simple pero es una poderosa herramienta de biolog’a molecular para realizar mœltiples manipulaciones en ingenier’a genŽtica durante el estudio de Y. lipolytica bajo la selecci—n de un mismo gen marcador."
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