REDBIO México 2010

Folio: 388
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Alimentos Funcionales y Biofortificación

Obtencion de Lactoferrina bovina recombinante en E. coli

I. A. GARCÍA MONTOYA (1), S. A. GONZÁLEZ CHÁVEZ (1), S. ARÉVALO GALLEGOS (1), J. SALAZAR (2), R. INFANTE RAMIREZ (1), G. EROSA DE LA VEGA (1), Q. RASCÓN CRUZ. * (1).
* Autor para correspondencia (Corresponding author) qrascon@uach.mx

1- Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Autónoma de Chihuahua, Cd. Universitaria s/n, CP 31070 Chihuahua, México Tel: (614) 414-4492.; 2- Proteo, Monterrey, N.L.

RESUMEN (ABSTRACT)
"La lactoferrina es una glicoproteína monomérica no hemica de unión a hierro perteneciente a la familia de las transferrinas producida por diversas especies animales mamíferos. Se ha identificado lactoferrina en secreciones de glándulas exocrinas y neutrófilos estando presente en suero y plasma. Es una proteína de 80 kDa, tiene 700 aminoácidos siendo similar entre especies. La lactoferrina (Lf) es reconocida como una proteína multifuncional con aplicaciones biológicas, farmacológicas y nutracéuticas por lo que es de gran interés industrial. Se obtuvo Lf bovina recombinante mediante la clonación del gen que codifica para esta proteína y se expresó en E. coli. La secuencia del gen clonado fue caracterizada in silico y registrada en la base de datos del NCBI con el numero de acceso EU812318. La expresión de la bLf fue posible mediante su fusión con la tiorredoxina en el vector de expresión pET-32a e introducido en la cepa de E.coli BL21(DE3) produciendo el plásmido pET32bLf-2*1. A partir de las clonas obtenidas que contenían el vector de expresión de la bLf se comprobó la expresión de la proteína bLf-Trx por medio de un Western blot con anticuerpo anti-Lf, y se analizó con un Northern blot la presencia de mRNA y así asegurar que realmente se trata de bLf. La proteína de fusión bLf-Trx expresada fue purificada por cromatografía de afinidad a Niquel, recuperándola con 99% de pureza. Durante el análisis de la expresión se determinó que la bLf-Trx es expresada en E. coli logrando tener 19% de bLf-Trx del total de las proteínas a las 4 horas después de la inducción."