REDBIO México 2010

Folio: 212
Tipo de presentación: Cartel
Tema: Otro

Purificación y caracterización cinética y molecular de una nueva cisteino proteasa aislada de tallos de Hohenbergia penduliflora (A. Rich) Mez.

Aurora Pérez 1*, Carol Carvajal 1, Sebastián Trejo 2, Maria J. Torres 3, Maria I. Martin 3, José C. Lorenzo 1, Claudia Natalucci 3, Martha Hernández 1
1 Laboratorio de Ingeniería Metabólica. Centro de Bioplantas, Universidad de Ciego de Ávila, Ciego de Ávila, Cuba. 2 Institut de Biotecnologia i de Biomedicina (IBB). Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, España. 3 LIPROVE, Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata, La Plata, Argentina.

RESUMEN (ABSTRACT)
"Las cisteino proteasas son enzimas ampliamente distribuidas en animales, microorganismos y plantas. Estas enzimas están involucradas en varios procesos fisiológicos y del desarrollo de las plantas. Bromeliaceae es una familia de plantas cuyos miembros usualmente producen gran cantidad de cisteino proteasas. Los extractos crudos de plantas de la familia Bromeliaceae con altos niveles de actividad proteolítica se han utilizado por largo tiempo en la medicina tradicional. Hoy día, estas enzimas son utilizadas en la industria alimenticia, biotecnológica y farmacéutica. En el presente estudio, las cisteino proteasas fueron aisladas a partir de tallos de Hohenbergia penduliflora (A. Rich) Mez. Una nueva cisteino proteasa se purificó por cromatografía de intercambio aniónico usando un sistema FPLC. Se realizó la caracterización cinética y molecular de la enzima purificada. En el ensayo de titración, la actividad residual de la enzima se comportó como una línea recta que interceptó a la abscisa en 1.97µM de E-64, lo que corresponde al 40% de enzima activa. Los parámetros cinéticos (Km, Vm, and kcat) fueron determinados con varios sustratos sintéticos. Los ensayos de cinética de la enzima purificada se determinaron con PFLNA (Km= 0. 33mM, kcat= 4.27 seg-1, kcat/Km= 13.22 seg-1 mM-1) pero no fue detectada actividad sobre Z-Arg-Arg-p-nitroanilida. También la enzima exhibió actividad frente a Z-Phe-Arg- p-nitroanilida and Bz-Phe-Val-Arg- p-nitroanilida. La masa molar de la enzima fue de 23. 412 KDa (MALDI-TOF-TOF) y su punto isoeléctrico aproximadamente 4.5. La secuencia N-terminal de la proteasa mostró elevada similitud con otras cisteino proteasas aisladas de tallos de diferentes plantas de la familia Bromeliaceae."